免疫共沉淀的原理及步骤(免疫沉淀IP的一些小技巧小经验)(1)

免疫共沉淀的原理及步骤(免疫沉淀IP的一些小技巧小经验)(2)

知其然知其所以然,在了解整个IP过程中的很多原理后,才能从本质上对实验的条件摸索进行优化,据此,下面整理了一些IP过程中应该注意的事项。

一、样本

样本是这个实验最为重要的因素,所以样本是否能处理好尤为关键,这决定了抗原抗体反应总的抗原质量,浓度以及抗原是否处于三级折叠的天然构象。所以在处理的时候,要去在冰上进行,包括离心机要调整至4度。

另外最关键的是裂解液的配置,合适的裂解液要使得所要提取的目的蛋白充分释放,另外还要保证免疫沉淀过程中抗原抗体以最适合的浓度进行结合,一般裂解蛋白的浓度为1ml对应10cm dish的细胞。

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