选择限制酶的两个依据
(1)根据目的基因两端的限制酶切割位点确定限制酶的种类
①应选择切割位点位于目的基因两端的限制酶，不能选择切割位点位于目的基因内部的限制酶。
②为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒 (但要确保质粒上也有这两种酶的切割位点)。
(2)根据质粒的特点确定限制酶的种类
①切割质粒和目的基因的限制酶一致，以确保产生相同的黏性末端。
②质粒上有标记基因等，所选限制酶尽量不要破坏这些结构。
③如果所选限制酶的切割位点不止一个，则切割重组后可能丢失某些片段，若丢失的片段含复制起点区，则切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制。
(1)利用RNA获得cDNA的过程为逆转录。(2)根据启动子和终止子的生理作用可知，目的基因应导入启动子和终止子之间。
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