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广东蛋白组学质谱(广东科学中心院士说)(1)

我们都知道棱镜可以把阳光折射出不同的颜色(图1)。这是牛顿(Isaac Newton,1642-1727)在300多年前发现的,我们把它叫做光谱。我们还知道人类能看到的可见光只是电磁波中很小的一个部分(图2)。在电磁波中,比可见光波长要长的有红外线、微波和无线电波;比可见光波长要短的有紫外线、X光和伽马射线

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图1,阳光的光谱

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图2,电磁波

利用不同波长的电磁波我们能够辨识出各种各样的物体,例如:

物质通常由多种不同的成分所组成(例如水由氢和氧组成,H₂O)。能不能辨识出物质的各种成分呢?这就需要质谱和色谱了


质谱

质谱是著名的英国科学家约瑟夫·约翰·汤姆逊(Joseph John Thomson,1856-1940年)发明的。认识汤姆森的人都叫他J.J.。汤姆逊出生于曼彻斯特,他的父亲开了一家专业书店,并就此结识了许多知识分子。父亲曾带小汤姆逊去见焦耳(James Prescott Joule,1818-1889),并告诉他有一天他将为曾经见过焦耳而感到荣幸。这样的经历使他从小就对科学深感兴趣。他14岁上了曼彻斯特大学,19岁时拿到奖学金去剑桥大学的三一学院深造。毕业后留校工作。不久即接任卡文迪许实验室(Cavendish Laboratory)主任。

卡文迪许实验室创立于1871年,第一任主任是电磁学的创始人麦克斯韦尔(James Clerk Maxwell,1831-1879)。麦克斯韦尔身体不好,只工作了几年就过世了。第二任主任是瑞利勋爵(John William Strutt,尊称Third Baron Rayleigh,1842-1919)。他不但学术精深,而且带头捐资为实验室筹得了大量资金购置设备。但他说好了只任5年。1884年汤姆逊接任实验室主任时年仅28岁(图3)。当时实验室主任遴选委员会的委员包括开尔文勋爵(William Thomson, First Baron Kelvin,1824-1907),流体力学的创始人乔治·加布里埃尔·斯托克斯(George Gabriel Stokes)和达尔文的儿子、英国皇家学会院士乔治·霍华德·达尔文(George Howard Darwin,1845-1912)。汤姆逊的入选并非碰巧。汤姆逊虽然只是个助理教授,但已经发布了好几篇有影响力的文章。他设计的真空管很有创意和前景。而且他为人诚恳。所以瑞利勋爵力荐他接班。

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图3,约瑟夫·约翰·汤姆逊(J.J.Thomson)

汤姆逊的真空管实验十分精巧(图4)。真空管的一头是加热器,另一头用于抽真空及注入不同的气体。气体在被加热后会产生射线(电磁波)。真空管的中间有一个线圈,根据电磁感应的原理,这个线圈既可以测量射线中的电磁波(电®磁),也可以控制电磁波(磁®电)。他根据射线穿过真空管时的偏转角度,计算出射线中电荷与粒子质量的比率。他发现,无论在真空管中使用哪种气体,这个比率都是相同的;据此他得出结论,组成气体的粒子是一样的。进而,他推论所有的物质都是由比原子小得多的相同的粒子所组成。他称这些粒子为“微粒”,这就是我们今天所称的电子。这一发现推翻了当时认为原子是物质最小基本单位的理论。他因此荣获1906年的诺贝尔物理奖。

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图4,汤姆逊的真空管

接着,汤姆逊带领他的学生弗朗西斯·威廉·阿斯顿(Francis William Aston,1877-1945)用真空管来研究带正电荷的离子。他们通过电离氖气产生氖离子,并引导氖离子流过电磁场,然后通过电磁场的偏转来测量电荷与氖元素质量之比。由此,他们发现氖有两种不同的原子结构(氖20和氖22),从而证明了氖元素有同位素(后来人们用这一方法发现许多元素的同位素)。此外,不同的元素质量不同,偏转角度也就不同,这就是质谱。他的学生阿斯顿因此获得了诺贝尔奖。

汤姆逊有一大批优秀的学生,其中获得诺贝尔奖的就有7位(表1)。他任卡文迪许实验室主任35年,把实验室建成了世界上最著名的实验室之一。

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表1

表1,汤姆逊的7位获得诺贝尔奖的学生,表中第2行是共同发明质谱的阿斯顿。

从汤姆逊的真空管实验至今,经过一百年的发展,质谱仪已经成为一种标准的实验检测设备。它可以测出几乎所有物质的成分。图5是现代质谱仪的工作原理图。电子束把待测的样品加热至蒸发,从而产生离子或电子(统称粒子,particles)。粒子由磁场加速。加速后的粒子由另一个磁场根据质量与电荷之比分离。最后由粒子检测器(detector)读取检测结果。图6是一台质谱仪。它能检测的物质多达数千种,是物理分析、化学分析、环境监测等行业不可或缺的设备。

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图5,质谱分析仪工作原理

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图6,现代质谱仪


色谱

色谱的方法是俄国植物家米哈伊尔·茨维特(Mikhail Semyonovich Tsvet,1872-1919)最先发明的。茨维特出生于意大利。他的父亲是一位俄国官员,他的母亲是一位意大利人。他出生不久母亲就过世了。他跟随父亲在瑞士长大,1893年在日内瓦大学获得学士学位,1896获得博士学位。同年,他的父亲应召回国,他也跟着回到了圣彼得堡。由于俄国不承认他国学位,茨维特一面教书一面又读了一个博士学位。1901年,他到华沙大学任教,在那里工作了13年(图7))。1914年,第一次世界大战爆发,华沙大学搬往俄国,他也随之搬了几次家,最后积劳成疾,病逝于沃罗涅什,终年仅47岁。

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图7,米哈伊尔·茨维特

在茨维特的时代,科学家们已经知道物体是由多种不同的物质组成的。作为植物学家,茨维特想从植物中分离出叶绿素及其他颜料。他设计了一个精巧的实验,这个实验分五步:

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这个实验简单易行,今天在中小学的实验室都可以做。

茨维特用这种方法分离出了叶绿素(绿色)、胡萝卜素(红色)和叶黄素(黄色),并把研究结果发表在德文的学术期刊上。他把这个方法叫做色谱法:Chromatography。这个词来此希腊语“chroma”和“graphein”的组合;前者意为颜色,后者意为图,加起来就是色图(色谱)。

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图8,茨维特的色谱法工作原理

当时茨维特的工作没有得到多少重视。这也许是因为这个技术还是实验性质,科学家们不清楚流体相的流体与固体相的粉末是怎样相互作用的。也不清楚分离出来的成分纯度有多高,后来,科学家们渐渐认识的这个相互作用来自一系列微小的力(如表面张力、范德华力、原子的吸引力、排斥力等)。通过固体相和液体相的精确组合,物质分离的精度可以达到极高的水平。

20世纪30年代有人用这一方法分离出了维生素A。色谱技术开始受到重视。

到了60年代,专业的色谱仪器开始出现。经过数十年的发展,现在的色谱仪主要有两种:(1)气相色谱仪

如图9所示,它的流体相是惰性气体(如氮气或氦气),固体相的色谱柱(column⑥)放置在炉子(oven⑤)。流体相的惰性气体把注入的样品带进色谱柱,加热了的色谱柱可以加速样品的分离,检测器(detector⑦)检测出分离结果并由数据系统(data system⑧)显示、记录。它的测量精度可达微克(mg)。图10是一台现代化的气-液色谱仪。与气相色谱仪相似的是气-液色谱仪(Gas-Liquid Chromatography)。它用固定液(通常是沸点高、难以挥发的聚合物)作为固体相。样品会在固定液中经历溶解、挥发、再溶解、再挥发的过程,样品的分离不但彻底而且快速。

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图9,气相色谱的工作原理

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图10,气-液色谱仪

(2)液相色谱仪或高效液相色谱仪

如图11所示,高效液相色谱仪会使用多种液体(solvent)作为流体相,这些液体抽去气体后混合并加压注入预处理用的色谱柱(pre-column),然后携带注入的样本进入色谱柱(column)。色谱柱的技术是关键,常用的材料是各种各样的硅胶。分离的结果可用多种方法读出,如光电管(diode array)、荧光检测器(fluorescence)及光折射检测器(refractive index)等。图12是一款高效液相色谱仪。与高效液相色谱仪相似的是反相色谱仪(reversed phase chromatography)。前者的流体相通常是有极性的,色谱柱则没有极性。这会使得分离的效率降低。后者使用没有极性的液体(如水-甲醇),色谱柱则具有极性,分离的效率较高。

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图11,高效液相色谱的工作原理

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图12,高效液相色谱仪

色谱仪可以检测出物质的各个组分,在化学、医学、工程、农业、商检和法检中都是必不可少的。

色谱法和质谱法的关键区别在于,色谱法用于分离混合物中的组分,而质谱法着重于检测样品组分的确切性质(如分子量)。我们可以结合液相色谱法和质谱法来分离物质的组分,然后对每一个组分进行鉴定。这就是液相色谱/质谱仪了(Liquid Chromatography / Mass Spectrometry, LC/MC)。(图13)

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图13,液相色谱/质谱(LC/MC)仪

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