整体分子量测定和糖型鉴定是抗体药物研发及生产中不可或缺的表征内容，而在完整蛋白层面进行测定可获得最为直接的测定结果。实现此类测定有赖于可提供较高分辨能力及质量精度的仪器; 测定中涉及的相对复杂的参数设置可能受多种条件的干扰而产生误导性结果。生物制药行业已将 LC/MS 广泛应用于治疗性蛋白质的分子量确定。这种方法快速、准确，可实现相对定量。准确的质量测量有助于确定预期的翻译后修饰 (PTM) 是否表达为正确的蛋白质序列，其还提供了同一样品中不同蛋白质或 PTM 的相对丰度。高分离度和高灵敏度质谱仪有利于这一分析的进行。本文介绍了一种使用AB 5600 Q-TOF 质谱仪进行的完整蛋白质分析的检测方法。
一、实验方法
1.仪器和试剂|
Instruments and reagents |
Producer |
|
超高压液相（UltiMate 3000） |
THERMO |
|
高分辨质谱（5600 QTOF） |
AB SCIEX |
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色谱柱（ZORBAX Eclipse Plus C8 2.1×50mm） |
Agilent |
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乙腈（Acetonitrile） |
Merck (Darmstadt, Germany) |
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甲酸（Formic acid） |
CNW (Shanghai, China) |
|
超纯水（Ultrapure water） |
Merck (Darmstadt, Germany) |
流动相条件：
- 1. 柱温60℃，上样量10μl
- 2. 正离子模式：A：0.1%甲酸水；
B：0.1%甲酸乙腈
流动相洗脱梯度表：
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Time(min) |
Flow-rate (μl /min) |
A% |
B% |
|
0.00 |
300 |
95 |
5 |
|
15.0 |
300 |
95 |
5 |
|
25.0 |
300 |
10 |
90 |
|
32.0 |
300 |
10 |
90 |
|
33.0 |
300 |
95 |
5 |
|
40.0 |
300 |
95 |
5 |
质谱条件：
AB 5600 Triple TOF质谱仪能够在控制软件（AnalystTF 1.7, AB Sciex）控制下进行一级质谱数据采集。一级采集范围900-4000。ESI离子源参数设置如下：雾化气压（GS1）：45Psi，辅助气压：45Psi，气帘气压：35Psi，温度：650℃，喷雾电压：5000V（正离子模式）。
二、质谱数据去卷积分析
通过BioPharmaView软件，对质谱数据进行去卷积分析
软件分析方法一般如下图，特殊蛋白样品要再调整
软件特点1：可以根据实际情况添加多种修饰，准确测定分子量，软件内包含200多种糖基化修饰糖型。
软件特点2：直观的检测报告展示形式
图1：质谱图标注
图2：去卷积后结果，展示分子量
三、服务简介
1、样品要求：浓度大于0.2ug/ul,体积大于50ul,含盐量不超过10mM
2、实验周期：7个工作日
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广州如期生物技术有限公司成立于2016年，始终以探索科学、服务客户为己任；致力于为高校、科研院所、医院、制药企业提供全面、便捷、专业的技术服务和产品。技术方面我们专注于生物医学领域：公司拥有完善的技术服务平台，覆盖分子生物学，转录组学、代谢组学、蛋白组学，表观遗传等多个科研平台。在产品方面，自主研究多种类型科研试剂盒20多项，如：COIP、CHIP、RIP等科研检测试剂盒，较之同类型的进口试剂盒，极大的降低了科研成本。
地 址：广州市黄埔区茅岗路286号313室
网 址：www.bioruqi.com
公众号：如期生物
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公司检测项目表：
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实验编号 |
项目名称 |
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1 |
基因表达量检测QPCR |
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2 |
菌种鉴定 |
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3 |
CoIP（免疫共沉淀） |
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4 |
GST-PULL |
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5 |
ChIP |
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6 |
RIP |
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7 |
Clip |
|
8 |
CHIRP |
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9 |
RNA pull-down |
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10 |
DNA pull-down |
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11 |
RNA-RNA pull-down |
|
12 |
EMSA |
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13 |
荧光素酶检测实验 |
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14 |
细胞培养实验 |
|
15 |
非靶向代谢组学 |
|
16 |
药材、植物、小分子鉴定 |
|
17 |
GCMS鉴定 |
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18 |
挥发物质鉴定（固相萃取） |
|
19 |
靶向代谢检测服务 |
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20 |
小分子短肽氨基酸鉴定 |
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21 |
降解多肽鉴定 |
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22 |
靶向方法包检测服务 |
|
23 |
小分子分子量测定 |
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24 |
小分子物质氢谱 |
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25 |
小分子物质碳谱 |
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项目名称 | |
|
26 |
DNA 质检、DNA大小分布测定 |
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27 |
蛋白（抗体、抗原）纯度检测 |
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28 |
超高分辨率质谱测试分子量 |
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29 |
蛋白毛细管等电聚焦电泳 (cIEF) |
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30 |
蛋白热稳定性（Tm）检测 |
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31 |
蛋白DLS粒径检测 |
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32 |
蛋白抽提实验 |
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33 |
Tricine SDS-PAGE小分子蛋白（3-20KD) |
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34 |
SDS-PAGE电泳（考染） |
|
35 |
SDS-PAGE电泳（银染） |
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36 |
琼脂糖电泳 |
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37 |
胶条、蛋白液样品鉴定 |
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38 |
蛋白质非标记定量技术lable free |
|
39 |
同位素标记定量ITRAQ |
|
40 |
蛋白DIA检测服务 |
|
41 |
Elisa |
|
42 |
WB蛋白质印迹法(Western blot) |
|
43 |
固相芯片 |
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44 |
液相蛋白芯片Luminex |
|
45 |
CHIP产物DNA测序(8G) |
|
46 |
IP产物mRNA测序(8G) |
|
47 |
IP产物lnc RNA测序(8G) |
|
48 |
IP产物circRNA测序(8G) |
