食用菌栽培准备（食用菌诱变育种具体操作方法可以分为哪几步）

本文系作者一直勇往直前不放弃原创，未经允许禁止转载。

在食用菌诱变育种中，一般选择单核孢子进行诱变处理。如果菌丝细胞内含有2个以上的核，由于基因突变具有随机性和独立性，各个细胞核不可能同时发生相同的基因突变，在其后代中就会出现不一致的菌落，且细胞核之间可能存在相互作用，影响突变性状的稳定，一般都不选择单核菌丝或双核菌丝作为诱变材料。

木碗蘑菇

在诱变处理食用菌单核孢子时，最好使单细胞的孢子处于悬浮状态，均匀分布在悬浮液中。采用物理诱变时，一般用生理盐水配制悬浮液即可。如果采用化学诱变剂进行处理，考虑到诱变剂可能引起pH改变，从而产生各种不同的效应，通常须使用缓冲液配制孢子悬浮液。食用菌孢子悬浮液的浓度应控制在105个/L左右，悬浮液中孢子数可用平皿稀释计数法、光吸收法或血细胞计数板进行测定，最好先测定孢子中的活孢子数。可以同时测定不同浓度的孢子悬浮液的细胞数和光吸收值，制定标准曲线，以后只测定光吸收值，就可从标准曲线上查出活孢子数。

在托盘上的新鲜白蘑菇 （牛肝菌）

在物理诱变中，使用紫外光诱变成本低廉，对人体损害较小，诱变效果也较好，是最常用的物理诱变方法之一。常用化学诱变剂分为2类：一类是烷化剂，常用烷化剂有甲基磺酸乙酯、亚硝基胍、乙基磺酸乙酯和芥子气等；另一类是碱基类似物，常用碱基类似物有5-溴尿嘧啶和2-氨基嘌呤。对不同的食用菌诱变材料而言，最合适的诱变剂和诱变条件不同，同一诱变剂对不同食用菌材料的诱变效应也不一样。一般而言，对同一个菌株采用不同的诱变剂进行多次诱变处理，诱变效果好于使用同一种诱变剂进行多次诱变处理。

食用菌栽培

杀菌率常用来表示各种诱变剂的相对剂量。诱变既可能产生正向突变，使食用菌产量、品质等性状得到改善，也可能产生负向突变。适宜的剂量应该是在确保产生高诱变率的基础上，尽可能促使变异向正向突变范围移动，这需要经过多次试验进行反复摸索。近年来对紫外光、X射线和乙烯亚胺等诱变效应的研究发现，使用偏低的剂量时正向突变较多地出现，使用偏高的剂量时负向突变较多地出现。在进行紫外线诱变时，常采用杀菌率高达99.9％99.9％的剂量，近年来倾向于采用杀菌率为70％~75％的剂量，甚至更低的剂量。

种植的蘑菇

1.物理诱变物理诱变通常在专门的设备上进行操作，研究人员只需将准备好的样品交给操作人员，并提出需要的照射剂量即可。一般在暗室的诱变箱或接种箱中安装15W紫外灯管，诱变前先打开紫外灯预热20min，使光波稳定。将10~12mL孢子悬浮液移入直径9cm的培养皿中，打开培养皿盖，将孢子悬浮液置于紫外灯管下方30cm处，照射时间为0.5~5min。将照射处理后的孢子悬浮液稀释后涂平板，或加入培养基增殖培养后再涂平板，但增殖培养时必须用黑纸包住培养器皿。整个诱变操作过程须在红光下进行，孢子萌发培养时也应注意避光。

器皿里的食用菌

2.化学诱变化学诱变剂处理后，必须及时终止反应。可以用大量稀释的方法终止诱变剂的作用，也可用解毒剂来终止。例如采用甘氨酸解除氮芥的作用，采用硫代硫酸钠终止硫酸二乙酯的作用，也可以采用提高pH来终止亚硝酸等酸性诱变剂的作用。采用甲基磺酸乙酯诱变处理食用菌孢子时，常用浓度为0.1~0.4molL。先将食用菌孢子悬浮在0.1mol/LpH7.0的磷酸盐缓冲液中，孢子浓度10个/mL；再取9mL孢子悬浮液，加入浓度为1.5moL的甲基磺酸乙酯溶液1mL，摇匀后静置保温3~6h，也可适当延长或缩短时间。最后进行离心、洗涤，稀释，涂平皿，或加入培养基培养过夜后，再涂平板，从长出的菌落中逐步筛选优良突变子。

白色的夏天牛肝菌

孢子经诱变和培养长出菌落之后，及时挑出单个菌落，进行突变体筛选。对于同宗结合真菌的担孢子，可以将挑出的单个菌落移至试管斜面上，直接进行农艺性状考察。于诱变材料是单核孢子，异宗结合真菌的担孢子萌发的菌丝体通常都是同核体。对于异宗结合真菌而言，诱变获得的单核体菌株只能作为杂交育种的材料，需要首先考察诱变的单核体菌株是否具有遗传性状变异，然后再将突变的单核体菌丝与可亲和的单核体菌丝进行杂交。对于诱变获得的单核体及其杂交获得的杂交子，都必须进行培养特性、农艺性状和商品性状考察，挑选优良的突变株材料或杂交子。待杂交子产生子实体或组织体之后，进行组织分离获得纯培养菌株，并经过多次栽培试验和示范，获得遗传稳定的突变体菌株。