非洲猪瘟怎样采样检测（通俗易懂非洲猪瘟实验室检测方法比较）

我国首次发生非洲猪瘟（ASF），很多检测方法都是参考OIE标准。OIE所推荐的实验室诊断方法包括几种。

第一，病毒分离，这种方法仅局限于参考实验室使用，或者是在一些专业实验室、能够分毒的实验室进行确诊，一旦分离到非洲猪瘟病毒（ASFV）可以进行后续很多细节性研究。

第二，进行病原检测，包括抗原或者核酸检测，使用免疫荧光方法，或者使用双夹心ELISA方法，或者是现在国内使用最多的PCR检核酸的方法来检测ASFV，一般采全血或脾、淋巴结、扁桃体和肾脏等高病毒含量的组织和脏器。还有胶体金试条、双夹心ELISA、LAMP、微流控芯片等检测方法。

第三，抗体检测。前面已经说过抗体是“雁过留痕”，如果感染后，一般情况下在7～10天会产生抗体，而且抗体持续时间长，这样的话，我们检测的窗口期时间更长，在后期也可以更方便的检出，所以检测血清组织液或者唾液也可以，一般情况下是采用ELISA或试纸条进行检测。

病毒分离的方法可以分离到活病毒，但是程序要求比较苛刻，且时间长，不适合推广。双夹心ELISA最大的优点是可以做大的、高通量的检测，它检测的是病毒抗原。胶体金试纸条、免疫荧光方法也是检测病毒抗原。检测病毒抗体的，主要是ELISA、IFA/FAT以及胶体金试纸条。PCR方法，主要是用来检测病毒遗传物质（DNA）。测序，可以作为一个非常重要的分析亲缘性、溯源、基因分型的方法。

实时定量荧光PCR的优势，一是特异性好，二是敏感性高。但是成本高、容易出现污染导致的假阳性。一旦样品检测足够多，在核酸产物大量存在的情况下，污染导致假阳性的风险就非常高。所以，要想做好一个标准的PCR检测，从实验室的设计开始就应该做好实验分区，同时做好污染核酸的清除。再者，出现假阴性，相当于漏检。原因很多，譬如操作失误，可能忘记加酶或者PCR条件设置不对，或者是程序出问题等，应该严格做好对照，带阳性对照（从DNA提取开始）；第2种可能，采样不确实或样品降解，建议设置带内参的PCR方法；第3种，就是有可能样品中有PCR抑制因子，检测腊肉或者一些处理过的加工食品的时候尤其要注意，样品中是不是有可对PCR进行抑制的成分，譬如季铵盐，EDTA，乙醇、脂肪、酚、多糖、一些高浓度蛋白质、SDS和醋酸钠等都是验证过可对PCR扩增具有抑制活性的一些有机或者无机的成分，处理方法是设置带内参的PCR方法，样品倍比稀释后再进行PCR检测。

（资料来源：本文摘自中国农业大学动物医学院副教授周磊老师，在2019年 “伊科拜克•猪兜讲坛” 第4期（总第32期）直播节目中分享的内容。根据节目视频整理，未经本人审阅，请以本人观点为准。未经允许，请勿转载。）