PCR是聚合酶链反应的缩写,这是一种非常强大的放大扩增技术,可以检测非常低的DNA水平它的核心是一种酶,它可以将少量的DNA进行大幅度增加因此,该技术普遍用于鱼虾各类疾病的检测、但是这种技术真的完美无缺吗?今天笔者就跟大家扒一扒,今天小编就来聊一聊关于白对虾黑鳃能用红霉素吗?接下来我们就一起去研究一下吧!

白对虾黑鳃能用红霉素吗(是检测对虾疾病的重要方法)

白对虾黑鳃能用红霉素吗

PCR是聚合酶链反应的缩写,这是一种非常强大的放大扩增技术,可以检测非常低的DNA水平。它的核心是一种酶,它可以将少量的DNA进行大幅度增加。因此,该技术普遍用于鱼虾各类疾病的检测、但是这种技术真的完美无缺吗?今天笔者就跟大家扒一扒。

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一、PCR技术检测虾病的优势,在哪里?

PCR具有高灵敏度和特异性。当一个假设的生物(通常是细菌或病毒)被确定时,可以进行DNA进行测序,并且确定引物序列是该生物的唯一标志。这些核苷酸序列是构成引物的碱基,引物是反应的模板,来自目标生物的DNA样本与引物混合,如果将引物与相同的DNA系列(4个碱基,DNA的组成在一起)组合。PCR可以用于确定病原体是否存在。

采用PCR技术,能够发现非常低水平的病原体,并通过量化生物体水平的变化,来确定疾病整个感染过程。然而,一些伪理论已经渗透到社会的各个方面,包括水产养殖行业。PCR被广泛滥用,但是很少人能够正确理解其工作原理。这可能会导致误报、出现假阳性或者假阴性,甚至误导养殖户采取了错误的应对措施,造成不必要的损失!

因此,笔者分享在PCR监测对虾疾病,可能出现的错误,仅供养殖户参考。

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二、为什么,第一次PCR检测的结果是阳性,第二次PCR检测的结果是阴性?

特定序列(引物序列)是科学家根据特定生物的特征而建造的。虽然人们期望引物序列是独一无二的,但如果它不是独一无二的,引物序列可能会与其他生物体DNA交叉反应。尽管很多科学家们都在研究某些生物独特的基因,尽一切努力将错误降至最低。但是对于一些病原体,如:对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的引物序列,是非常难以确定的。

众所周知,对虾能够将病毒DNA片段整合到它们的基因中,引物序列必须与感染的DNA序列抗衡,而不是与宿主基因组结合。PCR技术的本质是找出某种生物独一无二的引物序列,同时其他生物体中需要没有这种引物序列。也就是,某种病毒以某种引物序列作为检查的手段,但是后来发现其他病毒也具有这种引物序列,那么以前的一些检查结果,可能是存在错误的。

在对虾感染IHHNV的情况下,如果我们需要确定是哪种病毒,我们必须确保引物序列与发现病毒一致,否则结果可能出现错误!也就是如果进行两次PCR检测,如果采用引物序列不同,可能结果也不一样。

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三、PCR检测只适合个体,无法进行群体检测

虽然PCR技术目前广泛用于群体检测,但是,常常会出现错误的阴性结果。因此,PCR技术最合适用于检测个体,以确定携带病原体的对象状态,以及可能导致急性疾病的特定生物体的存在。

这一点一个很好的例子是:检查对虾白斑病(WSSV)的病毒的存在。这种疾病的主要传播途径是通过携带病原体进行传播。比如:亲虾携带病毒并传播给仔虾(PLs),然后由仔虾将病毒带入养殖环境当中。对于大多数高毒性病原体,对虾是无法承受的。如果池塘的条件适当,那么病毒繁殖起来,所有需要的是非常少量的病原体。

美国渔业协会出版了一本书,帮助养殖户处理各种可能影响对虾流行疾病问题。他们为PCR取样奠定了统计基础。然而,它们确定,PCR技术不适合用于幼体的检测,因为亲虾一次产的幼体可能有50万或50万个以上。

目前,对幼体进行取样检测,只能随机进行,但是在水产养殖中,我们对技术要求必须100%准确。但根据美国渔业协会的报告中称,用于PCR检测群体,最高准确率为98%。这意味着2%的个体仍然可以携带病原体。因此,在100万尾虾苗中,如果采用PCR技术进行检测,意味着至少2万尾虾苗可能携带病原体。

因此,在这里需要提醒养殖户的是,在虾苗抽样检测当中,抽样就原本就是一种概率性的东西,一批虾苗通过PCR检测合格,并不代表整批虾苗都是健康的。

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四、PCR技术并非合适所以病原体的检测

并非所有病原体都存在于组织当中,因此。如果感染水平非常低,那么对已知病原体目标组织进行采样非常重要。此外,对于一些病原体来说,仅仅取样是不够的。再次以WSSV为例,因此这种病毒在水温超过31°C时复制非常差。

即使,检测人员关注了正确的目标组织,病毒也可能处在休眠状态,发现它就像大海捞针一样。因此,PCR检测必须保证被检测动物处在利于病毒繁殖的条件当中。目前来说,将水温逐渐降低到20°C之间,并且保持几天,是确保PCR正确检测WSSV唯一方法。如果不这样做,那么不能百分之百的说这批虾中没有感染WSSV。事实上,当WSSV病毒处于休眠状态时,有许多检测都不能测出对虾是否感染了WSSV,但是最终对虾出现大量死亡,却是因为感染了WSSV。

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五、单独使用PCR技术,并不能确定SPF亲虾。

不含特定病原体(SPF)的概念非常重要,如果但从字面的意义上说,就是这种批亲虾当中没有某些病原体,生产出来的也是没有携带这些病原体的虾苗。然而,一些亲虾公司所宣称自家的SPF亲虾,大多是在试验室中“造出来的”。要知道,通过PCR检查的亲虾,并不能称为SPF亲虾,要知道PCR技术对于个体是最有效的,并非是群体。而且,SPF亲虾的确定需要一个完整的流程,而不是对一些亲虾进行测试,就可以得出这样的结果。

目前来说,使用正确的育种技术(NBC)、以及PCR检测和对象的历史生长情况上,是确保真正是SPF亲虾的最佳方法。

因此,如果使用得当,PCR检测是一种珍贵的工具,能够获得对于养殖户产生积极帮助的结果。但是如果针对群体检测,或者缺乏检测的一些技能,可能出现相反的检测结果。但这并不意味着PCR检测没有价值,它可以在一定程度上保证生物安全、以及对虾养殖业的可持续性,这主要看我们是如何使用该技术。