淀粉是植物体内贮藏的高分子碳水化合物,它可以分解成葡萄糖、麦芽糖等成分。不同的植物所富含淀粉的部位是不同的,主要有种子、果实、果梗、茎、根茎、球茎、鳞茎、 根、块根、髓心、皮层等。植物淀粉具体检测方法如下:
一、实验试剂
以下所有试剂如无特别注明,均为分析纯。实验用水为蒸馏水,去离子水或相当纯度的水。
(1)浓硫酸(比重1.84);
(2)9.2mol/L HClO4;
(3)2%蒽酮试剂;
(4)淀粉标准液:准确称取100mg纯淀粉,放入100ml容量瓶中,加60~70ml热蒸馏水,放入沸水浴中煮沸0.5h,冷却后加蒸馏水稀释至刻度,则每ml含淀粉1mg,吸取此液5.0ml,加蒸馏水稀释至50ml,即为每ml含淀粉100μg的标准液。
二、实验仪器
100ml容量瓶、分析天平(0.0001g)、水浴锅(BHS-4,宁波市鄞州群安实验仪器有限公司)、离心机(KH20A,湖南凯达科学仪器有限公司)、分光光度计(UV-1800PC,上海美普达仪器有限公司)等
三、实验步骤
(1)样品提取
将提取可溶性糖以后的残渣,移入50ml容量瓶中,加20ml热蒸馏水,放入沸水浴中煮沸30min,再加入9.2mol/L高氯酸2ml提取15min,冷却后,混匀,4000r/min离心10min,其残渣加10ml蒸馏水重复提取,至淀粉水解完全度测试不显示蓝色为止,并合上清液,用蒸馏水定容至100ml,待用。
(2)制作标准曲线
取小试管11支从0~10编号,按下加入溶液和蒸馏水。
按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸,充分振荡,立即将试管放入沸水浴中,逐管均准确保温1min,取出后自然冷却至室温,以空白作参比,在630nm波长下测其光密度,以光密度为纵坐标,以淀粉含量为横坐标,绘制标准曲线,并求出标准线性方程。
(3)显色测定
取植物提取液代替标准淀粉溶液,按上述步骤进行淀粉含量的测定,读取 OD值,从标准曲线得到提取液总的淀粉含量,然后再行计算样品中的淀粉含量。
四、计算
按下式计算淀粉的含量。淀粉水解时,在单糖残基上加了1分子水,因而计算时所得的糖量乘以0.9才为扣除加入水量后的实际淀粉含量。
式中 C-标准曲线查得的淀粉含量(μg);
V-提取液总量(ml);
a-显色时取液量(ml);
W-样品重(g)。
注:淀粉水解完全度试验 样品测定中可同时作1份用于淀粉水解完全度检验的样品,在酸解过滤后,将其残渣加上2ml水,搅拌均匀,吸2滴于白瓷盘上,加2滴I2-KI溶液,显微镜下观察,若出现紫蓝色颗粒,证明水解不完全,其正式测试样品需再加高氯酸水解,直至不出现蓝紫色为止。
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