蛋白质在等电点时，因为没有相同电荷而互相排斥的影响，所以最不稳定，溶解度最小，极易借静电引力迅速结合成较大的聚集体，因而沉淀析出同时蛋白质的黏度、渗透压、膨胀性以及导电能力均为最小，下面我们就来聊聊关于什么是大分子蛋白纯化?接下来我们就一起去了解一下吧!
什么是大分子蛋白纯化
蛋白质在等电点时，因为没有相同电荷而互相排斥的影响，所以最不稳定，溶解度最小，极易借静电引力迅速结合成较大的聚集体，因而沉淀析出。同时蛋白质的黏度、渗透压、膨胀性以及导电能力均为最小。
当外界溶液的pH>pI值，两性离子释放质子带负电。
当外界溶液的pH<pI值，两性离子质子化带正电。
当达到等电点时氨基酸在溶液中的溶解度最小。
PS：pH值在4-8（SP，CM）(常用磷酸盐,乙酸钠和Hepes等50mM)或者5-9（Q，DEAE，ANX）范围内(常用Tris,20mM)，同时缓冲液之间具有0.5-1个pH单位间隔
对于Q，DEAE，ANX带电基团的填料，避免使用阴离子的去污剂。对于SP，CM带电基团的填料，避免使用阳离子去污剂
通常情况下，缓冲液与PI至少相差0.5个单位；
在纯化的过程中离子交换层析缓冲液的设计：
1）阴离子交换柱（柱子填料为阳离子性质）
I）使用阳离子型缓冲液体系（否则会与填料相互作用）；
II）缓冲液pH高于目的蛋白pI约0.5-1个单位；
III）增加pH可以提高结合的强度。
2）阳离子交换
I）使用阴离子型缓冲体系（否则会与填料相互作用）；
II）缓冲液pH低于目的蛋白pI约0.5-1个单位；
III）降低pH可以提高结合的强度。
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