人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）是一种嗜上皮组织的无包膜双链环状DNA病毒，目前已发现约200种不同HPV型别[1]。根据其致病力的大小可以分为高危型HPV和低危型HPV。高危型HPV包括HPV16、18、26、31、33、35、39等，可以引起外生殖器癌、宫颈癌、高度外阴瘤变和其他部位的恶性病变等。低危型HPV主要包括HPV6、11、40、42、43、44等，主要引起肛门-外生殖器疣和皮肤疣等良性病变[2]。HPV病毒的基因组按功能可分为早期编码区（E区）、晚期编码区（L区）以及非编码区。早期编码区主要负责病毒DNA的复制、转录和翻译调控，其中E6、E7在高危型HPV导致癌症中发挥重要作用。晚期编码区参与病毒衣壳蛋白的合成，包括主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2[3-4]。
HPV是乳多空病毒科乳头瘤空泡病毒A属的病毒，只特异性感染人的上皮细胞，依靠上皮细胞的分化途径来完成其生命周期。HPV可能通过上皮表面的微磨损感染上皮基底层的细胞，利用伴随伤口愈合的基底细胞的横向延伸进入细胞[16]。HPV感染上皮细胞后，癌蛋白E6、E7可以通过各种机制逃避宿主的免疫系统监测，并且将自身基因整合进人基因组，使得病毒免于被免疫系统清除。E6和E7还能共同促进细胞增殖、延长细胞周期进程并防止细胞凋亡，使得病毒大量复制。衣壳蛋白L1和L2在上皮的最表层表达，并且进行病毒组装，最后，新的感染性病毒颗粒从上皮表面脱落[17-18]。
尽管目前对于HPV已经有广泛研究，然而对于低危型HPV的可用数据仍然有限。有研究显示在中国西南地区，HPV6是第2流行的HPV类型，同时也是最流行的低危型HPV[19]。因此本研究以最常见的5种低危型HPV类型HPV6、HPV11为研究对象，评价椿乳凝胶在体内外对于低危型HPV的抑制作用。
由于HPV真病毒的复制具有严格的宿主特异性和细胞分化依赖性，因此目前并没有成功建立HPV体外培养体系，也缺乏合适的动物感染模型，构建假病毒成为目前HPV研究快速有效的方法。研究发现，将HPV结构蛋白L1、L2基因进行密码子优化后，可以极大提高其在细胞中蛋白的表达，而这2种蛋白能够自我组装成病毒样颗粒（virus-like particles，VLP），其可以将外源性报告质粒包裹进病毒颗粒内，形成与天然病毒结构相似的假病毒，具有单次感染细胞的能力，通过检测报告质粒的表达可以间接反映病毒的感染情况[20-21]。
椿乳凝胶为株洲千金药业股份有限公司自主开发并独家生产的中药制剂，由椿皮、苦参、牡丹皮、乳香、冰片5味中药组方而成，具有清热燥湿、祛瘀生肌的功效，主要用于慢性宫颈炎之宫颈糜烂及中医辨证属于湿热瘀阻者。
根据其功能主治的特点，本实验对椿乳凝胶体内及体外抗低危型HPV病毒的药效学作用展开了研究。本研究成功建立了HPV6、HPV11假病毒感染293FT细胞的体外模型，发现假病毒能使细胞产生病变，影响细胞周期变化，并且抑制细胞凋亡。椿乳凝胶干预可以显著降低假病毒细胞感染能力，恢复细胞正常周期，促进细胞凋亡。
同时本研究利用HPV6、HPV11假病毒建立了雌性小鼠生殖器感染体内模型，病毒感染上皮细胞后其包裹的报告基因可以立即表达，通过小动物体内可见光成像系统检测GFP荧光表达可以反映假病毒在上皮细胞中的感染情况。研究结果显示，HPV6、HPV11假病毒成功感染小鼠，宫颈组织中病毒滴度显著升高，并且HPV6、HPV11的E7蛋白和E6、E7基因表达水平明显升高。同时宫颈组织上皮细胞出现增生和坏死，伴有明显炎性浸润，阴道pH值明显升高，研究显示正常阴道的酸性环境可以维持阴道微环境稳态，抵御HPV感染[22]。椿乳凝胶给药后，可以有效降低假病毒感染小鼠宫颈组织中的病毒滴度，抑制HPV6、HPV11的E7蛋白和其E6、E7基因的表达，保护宫颈上皮细胞。
综上所述，通过体内体外实验证明椿乳凝胶可以明显抑制低危型HPV复制，减轻低危型HPV感染引起的组织病变。
来 源：吴梦瑶，彭冬冬，龚 云，彭 印，张 鹏，张小冬，唐小燕，张妙红，姜德建．椿乳凝胶抗低危型人乳头瘤病毒的作用研究 [J]. 中草药, 2022, 53(14): 4399-4408 .
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