Toll 样受体 4（Toll-like receptor 4，TLR4）是由 Poltorak 等于 1998 年发现的 一种 I 型跨膜蛋白，其由 TLR4 基因编码，并表达于包括单核细胞，巨嗜细胞在内 的多种组织细胞中，可以识别革兰氏阴性细菌的脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）， 并通过 NF-κB 或 JNK/SAPK 途径启动细胞内的信号转导（图 1）（对 LPS 及其检 测产品的相关介绍请见 http://www.uscnk.com/topic/LPS-ELISA-Kit-may-Substitutefor-LAL-Test.html）。
天然免疫（又称固有免疫）是指生物在种系进化发育过程中逐渐形成的免疫方 式，它在个体出生时即具备，不针对特定抗原且具有广泛的作用范围。天然免疫在 机体防御机制中具有重要意义，其可以作为防御致病微生物感染的第一道防线。研 究显示，TLR4 能通过直接识别包括 LPS，脂磷壁酸（lipoteichoic acid，LTA），dsRNA 等在内的病原相关分子模式（pathogen associated molecular pattern，PAMP）而在激 活天然免疫过程中起到关键作用。近年来，该分子在引起炎症反应，抗病毒感染， 肿瘤治疗和调节免疫应答等过程中的作用均得到了一定的研究。
常见的关于 TLR4 的研究包括体外和体内模型，而动物体内模型的研究多基 于小鼠模型，所以在小鼠的 TLR4 相关检测试剂方面，本公司进行了大量的研发 工作，并推出了多种产品，例如：重组蛋白 RPA753Mu01，该蛋白序列的选择 来自于对全长蛋白的拓扑结构分析和抗原表位分析，最后选定了包含 Asn26~Glu269 氨基酸的胞外区片段作为重组蛋白的表达序列，具体序列信息见 图 2。 该重组蛋白的 SDS-PAGE 鉴定图见图 3。
MHHHHHHSSGLVPRGSGMKETAAAKFERQHMDSPDLGTDDDDKAMADIGSEF-NPCIE VPNITYQCM DQKLSKVPDD IPSSTKNIDL SFNPLKILKS YSFSNFSELQ WLDLSRCEIE TIEDKAWHGL HHLSNLILTG NPIQSFSPGS FSGLTSLENL VAVETKLASL ESFPIGQLIT LKKLNVAHNF IHSCKLPAYF SNLTNLVHVD LSYNYIQTIT VNDLQFLREN PQVNLSLDMS LNPIDFIQDQ AFQGIKLHEL TLRGNFNSSN IMKTCLQNLA GLHVHRLILG EFKDERNLE
图 2 RPA753Mu01 序列信息
此后用该蛋白免疫兔，在获得抗血清后通过抗原特异性的亲和层析得到高 浓度和高纯度的抗体 PAA753Mu01，其 Western Blot 及 IHC 鉴定图见图 4 及图 5。 同时，对于该抗体进行各种标记物偶联，得到生物素、FITC 等标记的抗小鼠 TLR4 多克隆抗体（PAA753Mu71，PAA753Mu81）。
小鼠 TLR4 蛋白的物种来源是小鼠，而由于种属免疫特性的局限，制备该蛋 白的单克隆抗体不能使用小鼠作为免疫动物，基于这一点，本公司应用正在展 开的科研课题“大鼠单克隆抗体研发”，以大鼠作为免疫动物制备该蛋白的单 克隆抗体，产品正在研发中，请持续关注。
针对人的 TLR4 蛋白，本公司研发的重组蛋白 RPA753Hu01 包含的氨基酸 为 Phe326~Ile634，且用该蛋白不仅制备了多克隆抗体 PAA753Hu01 还制备了高 特异性的单克隆抗体 MAA753Hu22，其已被用于 WB、IHC 和 ELISA 等多项实 验中。
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