高温灭菌是指用热能杀死微生物。其原理是高温使原生质中的蛋白质变性、使酶失活，致使微生物死亡。高温灭菌主要有高压蒸汽灭菌法、干热灭菌法和灼烧灭菌法几种。如果操作不当，即达不到预期的灭菌效果。现就常见错误分析如下。
蒸汽灭菌属湿热灭菌，由于湿热灭菌有潜能存在，被灭菌物体的温度比蒸汽的低，蒸汽在其表面凝结成水，放出潜能，可迅速提高被灭菌物体的温度。又由于水和水蒸汽比空气的热容量大、导热快、穿透力强，所以，与干热灭菌相比，灭菌需要的温度低、时间短。由于高压蒸汽灭菌法水蒸汽的温度随其所受压力的增加而升高，因而灭菌用的高温蒸汽都是通过加压获得的。
手提式高压灭菌锅操作中常见的错误有：
（1）排气不彻底。在升压前应将锅内冷空气排净，因空气是热不良导体，若不排净，冷空气就会聚集井滞留在灭菌锅中消毒筒的中下部，围绕在待灭菌物的周围。在这种情况下，假若锅内仅排除一半空气，当压力表指针达到105Pa时，锅内实际温度仅能达到 112℃，比要求的 121℃低9℃之多，将导致灭菌不彻底，可能造成大面积染菌。（自动的高压灭菌锅 上下排气阀 都要打开 然后加热 排空气）
灭菌锅内的冷空气是通过排气软管排出的，上述情况将造成灭菌筒外的蒸汽直接经排气阀排出锅外，灭菌锅内的空气排放受阻。
（3）消毒筒内物品堆积太紧、太满。阻碍蒸汽的流通和热交换，使容器内升温减慢，造成物体内部杀菌不完全。
（4）升温过快。灭菌的时间是以达到要求温度后的持续时间计算的，但温度的升降过程同样起到杀菌的作用，升降温度过快会通过影响总的积温而影响灭菌效果。另外，升温过快，特别是使用外源蒸汽的情况下，会造成被灭菌物体内部升温滞后于压力表指示温度。
（5）灭菌的物体体积（容量）过大。组织培养中或常规微生物实验中，高温蒸汽灭菌通常要在 121℃（即蒸汽压力为1kg／cm2或 15磅／寸2，或0.105MPa）下保温15min。这一规定仅适用于试管、三角瓶中小于200ml容量的。若体积太大，特别是固体培养基，会造成灭菌不彻底，应适当延长灭菌时间。
规定的灭菌温度和时间是经过科学试验确定的，只要按照正确的灭菌程序是能达到灭菌目的的。但在实践中常有人为了“保证彻底灭菌”而任意延长灭菌时间。这样忽视了杀菌过程中温度对培养基成分的破坏作用，是得不偿失的。
（7）温度不稳定。灭菌过程中温度（压力）忽高忽低，特别是手提式电能灭菌锅，它没有控温装置，难于控温。操作者可配置调压变压器，通过调节电压控温。此外，还常遇到灭菌锅内加水太少（应加 2～3L）；容器内装的溶液量过多（应少于2／3）；安全阀失灵等问题。
二、 干热灭菌干热灭菌指在烘箱160℃温度下，维持 2h，消除物体上的微生物的方法。常见错误有：
（1）将灭菌物品（如培养皿）堆摞放置，且堆得过满、过挤，阻碍空气流通和热量的传递、交换；
（2）升温时不打开箱顶通风孔，影响箱内冷空气及水汽的排除；
（3）高温（80℃以上）下开箱取物，热蒸汽喷出造成烧伤及突然降温，使玻璃器皿破裂；
（4）温度过高（180℃以上）造成包装纸、棉塞焦化，失去防菌或过滤作用；
（5）将不耐热的枪头、离心管、试管帽、滤器等塑料制品放入烤箱内灭菌，而致熔化。
三、灼烧灭菌即直接利用火焰将微生物灼烧致死。特点：简便、迅速、彻底。主要用于接种工具及器皿的灭菌。如接种杯、镊子、剪刀、玻棒、瓶口及其封口用的铝箔的灭菌常见的错误有：
（1）接种工具的灭菌范围不够，如长度不够，灼烧时没有旋转造成内外侧灭菌不匀；
（2）接种工具没有降至常温即用于接种；
（3）对玻璃器皿灼烧过度，使棉塞、封口膜焦化或熔化
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