生物3D打印技术代表了目前3D打印技术的最高水平，其特点及优势我们已经做了详细的阐述（感兴趣者可参考往期精彩文章）。目前，越来越多的科研工作者将该技术应用在个人的研究方向中，并取得较好的研究进展，但对于刚进入生物3D打印领域的人，在实际操作过程中经常会碰到一些让人头疼的小问题，本文根据小编个人经验，对含细胞3D打印及培养过程中常见问题进行汇总，并简述解决方案。
Q1: 常用于含细胞打印的生物墨水有哪些？多数用于含细胞打印的墨水都具备温敏特性，就是通过温度变化可以实现其凝胶-溶胶的转变，并且其凝胶-溶胶转变温度范围需在0-37℃。目前最具代表性的温敏细胞打印水凝胶墨水为明胶，以此为基础加入其它生物相容性良好的材料及成分，使生物墨水具备生物相容性好、易上机打印、结构强度高等特性，能够满足广大科研工作者的需求（我们的目标：让每一位客户都有一款适合自己的墨水）。
首先，我们需要确认选用的墨水是否适合细胞的生长，具体操作方法：直接将墨水与细胞按比例混合，移液器吸出滴至培养皿中，培养观察（此过程是为了排除上机打印对细胞的损伤）；
然后，确认墨水对细胞生长无明显影响后，我们就要考虑是否在打印过程中“暴力操作”导致细胞存活率不高（此处需对照下表，仔细回忆，认真反省），具体表现为：
1)细胞在上机打印前已经状态不佳（为了赶进度，不顾细胞状态直接上机打印）；
2)打印过程耗时太长（墨水已经配制好了，发现缺东少西，等所有东西准备好了，一个小时已经过去了）；
3)长时间处于过凝胶状态（墨水已经处于过凝胶状态，不断增大挤出压力，“暴力”打印）；
4)交联时间过长（总是担心打印结构强度不够，过度延长交联时间）；
如果有以上几种行为，相信此刻你已经明白为什么细胞总是状态不佳，如果能在打印过程中认真总结并优化各个打印环节，相信细胞活率一定能直线上升。
终于打印出完美的结构体，看着细胞在结构中成团(片)生长，内心无比欢喜，每天总想多看几眼，随着时间延长，慢慢的发现结构边缘塌陷了、结构体散开了，又或者，荧光染色的时候每进行一步、结构就损失一点，等到最终拍照的时候发现，什么都没有了（这种心情我懂的），小编建议如下：
1）培养换液过程尽可能动作轻柔，请勿使用移液器直接冲洗结构，可沿培养皿内壁缓慢加入培养基及其它试剂；
2）选用离子交联方式的，可进行再交联（具体操作：换液前去除培养基，加入交联剂进行再交联，之后加培养基正常培养即可）；
3）荧光染色操作过程，去除非必需操作环节（如许多荧光染料染色前完全不需要进行Triton X-100处理），降低抗体孵育温度（将抗体孵育温度由37℃改为室温或4℃过夜，适当延长孵育时间效果一样很好）
4）如果所有环节操作均小心谨慎，但结构强度依然不符合实验需求，说明需要更换强度更高的墨水进行实验。
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