组织分离是一种用子实体的某一部分来分离菌种的方法。
因为组织分离法操作简便，不易带入杂菌，容易获得纯菌种。后代不易发生遗传重组等变异，能保持原菌株的优良特性。因此组织分离是目前应用最广泛的分离手段。
（图片来源：摄图网）
组织分离注意事项
种菇的选择:最好采用正处于旺盛生长中的幼嫩子实体或菇蕾作为分离材料，选择菇形正常，菌盖圆整，顶端较尖，尖顶凸起完整，菌柄圆正，菌柄短而结实，大小适中，无虫害、霉变或杂菌感染的子实体，鲜品或干品均可。不要选择很老的子实体做组织分离，由于子实层已经发育成熟，很容易在取组织的同时取到孢子，成为混合菌种。而幼嫩的子实体不容易污染，组织分离容易成功。
一般用野生或栽培的新鲜子囊果(子实体)，也可用干子实体来进行分离，干子实体作菌种分离材料的成活率及子实体产量均比新鲜子实体作分离菌种的材料成功率更高。
种菇的采集:菌柄基部最好带少量土壤一起采集，用吸水纸包裹2~3层，再用报纸包裹，低温下带回实验室。不要把菌柄基部剪掉，留下空心的子实体进行分离。
注意一般不要把标本放入塑料袋内运送，也绝对不能用烘干的办法处理需要分离的标本。
分离菌种尽量不要用酒精、升汞、来苏尔、煤酚皂、甲醛、二氯异氰尿酸钠等消毒剂对子实体表面进行消毒，因为这些消毒剂容易浸入子实体内部，杀死菌丝，导致所有分离物都不成活;也不需要用无菌水多次清洗，水容易渗透入菌肉组织，把表面的杂菌带入接种块导致污染。
组织分离时可以把子实体表面快速在酒精灯火焰上通过2一3次，适当灼烧一下表面。
切取组织块时，尽量不要穿过菌肉，因为没有表面消毒，容易导致全部污染。
组织分离的方法
1. 选择无污染并菇形健壮的蘑菇幼菇(6分成熟)，采摘后及时放入灭过菌的纸袋中带回接种室，连同母种用试管培养基等用品一起放入接种箱或超净工作台内消毒。
2.先用75%的酒精消毒双手，将镊子、接种铲、小刀等接种用用具用酒精消毒，用酒精棉擦一下，拿到酒精灯上烧一下。
3.用略干的酒精棉球将子囊果菌柄特别是基部与土壤交界处的灰尘或泥土擦拭干净，擦拭过程中及时更换酒精棉球。
4.切开羊肚菌，切取菌柄与菌盖交接处组织较厚的部位，什么地方肉厚用什么地方，切取菌柄2~5mm组织块2~3块，用镊子夹住，将组织块在无菌水中涮一下，将组织块在酒精灯上快速的过几下。（在这个过程中少用升汞或酒精消毒，避免将羊肚菌菌丝全部杀死。）
5.将组织块放入培养皿培养，在22~25℃避光培养，2~3d萌发出新菌丝，新菌丝长到培养基上，48小时后，此时菌丝长约0.2~ 0.4 cm，菌丝粗壮；56 ~ 72 h后，成功萌发的菌丝将长至0.5 ~ 1.5 cm长，菌丝纤细，无色，不浓密，前端近似整体，根根分明，此时可挑取菌落尖端进行挑出纯化。
6.纯化后的试管要贴上标签，注明接种日期和品种的名称。
7.纯化的羊肚菌12 h左右，可见到从接种块萌发到培养基上的新生菌丝，7天左右长满试管，并出现白色菌核，10天左右，菌核有初始的白色、小，逐渐变浅黄变大；培养15天左右可以放后4度冰箱保存。
得到纯菌种后进行转管操作，15～18天菌丝即可长满试管，挑选菌丝健旺无污染的菌管再进行转接扩繁，须经出菇试验合格后用于生产。
羊肚菌皮薄，遇水，酒精不会萌发，根据以上方法，可进行多次试验，根据实验操作来调整相关细节，以上操作仅供参考。如您有更好的技术，请与我们联系，更好沟通交流。
其次，羊肚菌作为一种子囊菌，与其他食用菌不同的是，最大缺点是容易退化，变异和生霉，因此，分离菌种要进行出菇和比较试验。
本文综合自我们自己的实验室试验，百度百科，《羊肚菌生物学基础、菌种分离制作与高产栽培术》贺新生著；如有侵权，请联系作者删除。如有不实和错误，欢迎批评指正。
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