大家好,我是流式荧光崔工,一个旨在链接与流式荧光相关的朋友,一起赚钱、一起学习、一起工作、一起生活的靓仔。
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上个月崔工做了一个调查问卷
问卷的内容是你知道国内做流式荧光微球的厂家有哪些吗?
昨天将后台统计结果公布给了大家,并告知大家可能还有老师没来得及填写调查问卷,也有厂家没有列在名单中,有遗漏的大家可以给崔工发私信,崔工会加上去。
今天就有老师联系崔工,告诉崔工还有那些,现更新如下:
国产流式荧光微球厂家 | |
序号 |
厂家名称 |
1 |
厦门福流生物 |
2 |
苏州纳微生物 |
3 |
深圳唯公 |
4 |
湖北新纵科 |
5 |
北京指真生物 |
6 |
北京胡曼智造 |
7 |
苏州为度 |
8 |
杭州中瀚盛泰 |
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昨天有老师问崔工,FITC与抗体交联的原理是什么?
崔工先讲下什么是FITC?
FITC,中文名异硫氰酸荧光素,又称为荧光素-5-异硫氰酸盐,其形态为黄色粉末,有吸湿性,易溶于水和酒精溶剂,在避光干燥条件下可保存多年,是一种生化试剂。
分子式:C21H11NO5S
分子量:389.38
最大吸收光波长为490-495nm
最大发射光波长为520-530nm
它能与各种抗体蛋白结合,结合后的抗体不丧失与一定抗原结合的特异性,并在碱性溶液中仍有强烈绿色荧光,加酸后析出沉淀,荧光消失。
通过在荧光显微镜下观察或流式细胞仪分析可对相应抗原进行定性、定位或定量的检测。
用于医学,农业和畜牧等方面,可对由地细菌病毒和寄生虫等所致疾病进行快速诊断。
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当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时,主要是蛋白质上赖氨酸的R氨基与FITC荧光素的硫碳胺键结合,形成FITC蛋白质结合物。
具体的标记方法如下:
(1)将待交联的蛋白(浓度≥1mg/mL)对交联反应液透析三次4℃,至pH=9.0。交联反应液配制方法:7.6gNaHCO3,1.06gNa2CO3,7.36gNaCl,加水定容至1L。
(2)将FITC溶于DMSO中,浓度为1mg/mL。每次交联使用的FITC均应新鲜配制,避光。
(3)按P:F(蛋白质:FITC)=1mg:150μg的比例将FITC缓慢加入于抗体溶液中,边加边轻轻晃动使其与抗体混合均匀,暗处4℃反应8h。
(4)加入5mol/L的NH4CL至终浓度50mmol/L,4℃终止反应2h。
(5)将交联物在PBS中透析四次以上,至透析液清亮。
(6)交联物的鉴定
蛋白浓度(mg/mL)=[A280-0.31×A495]/1.4
F/P比例:3.1×A495/[A280-0.31×A495],该值应介于2.5~6.5之间。
(7)FITC交联的蛋白应置于Ph7.4的磷酸盐缓冲液中,加入0.1%NaN3、1%BSA,4℃避光保存。
最后储存条件:-20℃干燥避光保存,有效期一年。
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