2017年,CAR-T细胞疗法的出现,使得越来越多的人开始关注细胞治疗领域,包括干细胞治疗、TCR-T疗法等等。几乎所有的细胞治疗都有一个共同点,即都需要使用细胞因子来诱导细胞增殖或分化。
细胞因子虽然在细胞中含量很少,但是种类丰富,并且是作用广泛,那么,到底什么是细胞因子?细胞因子的作用是什么?怎么选择合适的细胞因子?
1.什么是细胞因子
细胞因子分泌图
为了维持机体的生理平衡,抵抗病原微生物的侵袭,防止肿瘤发生,机体的许多细胞,特别是免疫细胞合成和分泌许多种微量的小分子量可溶性蛋白与多肽类因子,这样一大类因子已发现的有上百种,统称为细胞因子。
它们在细胞之间传递信息,可广泛调控机体免疫应答、细胞生长分化以及造血功能,并参与炎症损伤等病理过程,在异常情况下也有可能引起发烧、炎症、休克等病理过程。
细胞因子包括淋巴细胞产生的淋巴因子、单核细胞产生的单核因子、各种生长因子等。
2.细胞因子的分类
白细胞介素因子(interleukin,IL)∶由淋巴细胞、单核细胞或其他非单个核细胞产生的细胞因子,在细胞间相互作用、免疫调节、造血以及炎症过程中起重要调节作用。
集落刺激因子(colony-stimulating factor,CSF)∶能够刺激不同发育阶段的造血干细胞和祖细胞增殖的分化,还可促进成熟细胞的功能。
干扰素(interferon,IFN)∶最初发现某种病毒感染的细胞能产生一种物质可干扰另一种病毒的感染和复制,因此得名。由白细胞、成纤维细胞和活化T细胞所产生,具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等作用。
肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)∶最初发现这种物质能造成肿瘤组织坏死而得名,除具有杀伤肿瘤细胞外,还有免疫调节、参与发热和炎症的发生。
转化生长因子-β家族(transforming growth factor-βfamily,TGF-βfamily)∶由多种细胞产生,主要包括TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGFβ1β2以及骨形成蛋白(BMP)等。
趋化因子家族(chemokine family)∶能够趋化细胞的迁移,吸引白细胞移行到感染部位,在炎症反应中具有重要作用。
其他细胞因子∶如表皮生长因子(EGF)、血小板衍生的生长因子(PDGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、肝细胞生长因子(HGF)、白血病抑制因子(LIF)、神经生长因子(NGF)等等。
3.细胞因子的作用
细胞因子研究有助于阐明分子水平的免疫调节机理,有助于疾病的预防、诊断和治疗,因此相关研究具有非常重要的理论和实用意义,应用前景广阔。
利用基因工程技术生产的重组细胞因子已用于治疗肿瘤、感染、炎症、造血功能障碍等,并收到良好的疗效。
作用类型∶参与免疫应答与免疫调节、刺激造血功能、细胞因子与神经-内分泌-免疫系统网络。
作用方式∶1.自分泌作用。2.旁分泌作用。3.内分泌作用。
作用特点∶多效性、重叠性、协同性、拮抗性。
4.细胞因子选择标准
种属来源∶
细胞因子等重组蛋白也有不同的种属来源,例如人源、小鼠源、大鼠源等等,可以根据实验需求选择合适的种属。
一般来说,不同种属之间蛋白同源性(序列一致性)在80%以上的基本上可以确定为有交叉活性,可推荐使用。
表达系统∶
最常用的细胞因子表达系统是大肠杆菌表达系统和哺乳细胞表达系统,此外还有酵母表达系统和昆虫表达系统等。
目前,临床和实验室应用的细胞因子大多来源于大肠杆菌。选择表达系统之前需要充分了解自己的研究目的,根据应用来选择最合适的表达系统。
例如有些蛋白需要经过翻译后修饰才具有活性,哺乳动物细胞可以提供这样
的修饰,但细菌细胞往往不能。
5.重组蛋白常用表达体系
质量指标∶
细胞因子的质量对实验的影响不容小觑,一旦选择失败将直接导致实验无法顺利开展,因此选择质量有保证的产品至关重要,好的品牌会对其蛋白产品进行各种质控,以确保蛋白的品质和实验效果。
若用来作为动物免疫抗原进行检测类抗体的研究,纯度大于80%即可;若用于晶体及晶体结构研究,纯度要大于95%。
随着细胞研究的深入,对细胞培养各方面的要求也越来越高。但是血清的成分较为复杂,会对一些高要求的基础研究的结果产生较大的影响,尤其是药物分析、新药研发等方面。而且血清中还含有一定的细胞毒性物质和抑制物,对细胞分化产生作用,影响某些功能的表达,甚至有些细胞是不能在血清中存活的。因此无血清培养基正在崛起。
想要利用无血清培养基使细胞生长状态良好,必须添加一定量的合适的细胞因子,如EPO、NGF、PDGF、EGF、M-CSF等。
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