点击关注我 药研助力社 或扫码关注我，更多干货知识免费分享
什么是方法验证？
药学方法学验证定义：方法验证即根据检验项目的要求，预先设置一定的验证内容和验证标准要求，并通过设计合理的实验来验证所采用的分析方法是否符合检验项目的要求。
什么时候要方法验证？
一、建立质量标准时，应对分析方法中的各检验项目进行完整的验证。
当药品生产工艺变更，制剂的组分变更，原分析方法修订时，可根据变更的内容决定对分析方法进行部分验证，还是完整的验证。
二、当原料药合成工艺发生变更时，可能引入新的杂质，杂质检查方法和含量方法的专属性就需要进行验证，以证明有关物质检查方法能够检测新引入的杂质，且新引入的杂质对主成份的含量测定应无干扰。
三、当质量标准中某一项目分析方法发生部分改变时，如采用高效液相色谱法测定含量时，检测波长发生改变，则需要重新进行检测限、定量限、专属性、准确度、精密度、线性等内容的验证，证明修订后的分析方法的合理可行。
当变更达到一定程度时，则需要完整的验证。如分析方法完全改变，则应按新方法进行完整的验证。
四、对于仅需按照实验室日常测试操作步骤即可测定的检验项目不需要进行验证，如外观、崩解时限、密度、重量、pH 值、灰分、装量等。
检验项目与验证指标有哪些？
检验项目分类：为鉴别、杂质定量检测、杂质定性检测，含量测定、溶出度测定、校正因子六类。
鉴别类主要验证指标：专属性、耐用性
杂质定量检测验证指标：准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围、耐用性。
杂质定性检测验证指标：专属性、检测限、耐用性。
含量测定验证指标：准确度、精密度、专属性、线性、范围、耐用性。
溶出测定验证指标：准确度、精密度、专属性、线性、范围、耐用性。
校正因子验证指标：准确度、精密度、专属性、定量限、线性、范围、耐用性。
各验证指标验证试验应该怎么做？
（一）准确度
定义：采用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。
测定浓度：
1. 含量：标示量80%、100%、120%，每个浓度各3份
2. 杂质测定：杂质限度浓度50%、100%、150%，每个浓度3份
数据要求：
1. 需报告已知加入量的回收率（%）
2. 需测定结果的相对标准偏差。
回收率限度要求：
1. 根据待测物质含量不同，回收率限度也不同。
2. 一般主成分含量测定，采用高效液相测定法，回收率限度控制在98%至102%。
3. 一般杂质定量测定，根据杂质限度不同，回收率限度也不同。如杂质限度为0.1%，回收率限度控制在90%至110%。如杂质限度为1%，回收率限度控制在95%至105%。
（二）精密度
精密度定义：在规定的条件下，同一份均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。
测定浓度：设计3个不同浓度，每个浓度3份。或设计100%浓度水平供试品6份
数据要求：需报告标准偏差、相对标准偏差。
相对标准偏差可接受范围：
1. 根据待测物质含量不同，相对标准偏差可接受范围也不同
2. 一般主成分含量测定，采用高效液相测定法，相对标准偏差可接受范围控制在±2%。
3. 一般杂质定量测定，根据杂质限度不同，相对标准偏差可接受范围也不同。如杂质限度为0.1%，相对标准偏差可接受范围控制在±6%。。如杂质限度为1%，相对标准偏差可接受范围控制在±5%。
（三）线性与范围
线性定义：线性指在设计的范围内，测定响应值与试样中被测物浓度呈比例关系的程度 。
范围定义：范围指分析方法能达到一定精密度、准确度和线性要求时高低限浓度或量的区间。
测定浓度：
1. 含量测定：至少标示量的80%到120%，推荐50%到150%。
2. 杂质定量测定：定量限至限度的200%。
3. 溶出度测定：限度的80%到120%。如果规定了上下限，且上下限范围浮动不一致。测定浓度应为下限的负20%至上限正20%。
4. 上述浓度覆盖范围为最低要求，实际实验可根据项目要求拓宽浓度覆盖范围。在设计浓度范围内至少设计5个梯度浓度点。
数据要求：进行线性回归，给出回归方程与线性图谱，报告相关系数r，截距及其与100%浓度的比值。
相关系数要求：
1. 杂质定量测定：r≥0.990
2. 含量测定：r≥0.998
3. 溶出度/释放度测定:r≥0.990
（四）检测限与定量限
检测限的定义：检测限指试样中被测物能被检测出的最低量。
定量限的定义：定量限指试样中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果 应符合准确度和精 密度要求 。
测定浓度：可以用线性溶液逐级稀释配制定量限或检测限溶液
测定方法：
1. 直观法：用已知浓度的被测物 ，试验出能被可靠地检测出/定量检测出的最低浓度或量。
2. 信噪比法：用于能显示基线噪声的分析方法，即把已知低浓度试样测出的信号，与空白样品测出的信号进行比较，计算出能被可靠地检测出或定量检测出的被测物质最低浓度或量。
3. 响应值标准偏差和标准曲线斜率法：
4. 一般推荐使用信噪比法。
数据要求：
信噪比法-检测限：S/N≥3，n≥3，RSD≥20%
信噪比法-定量限：S/N≥10， n≥5，RSD≥10%
（五）耐用性
耐用性定义：指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为所建立的方法用于日常检验提供依据。
耐用性适用范围：
1方法开发与筛选时，应考虑其耐用性。
2若测定条件苛刻，应在方法/标准中进行注明可接受变动的范围。
3可以通过单因素变动，确定可变动的范围。
4可接受变化范围内，各条件下系统适用性应满足要求，测定结果与原条件相比应无变化。
液相色谱法典型的变化条件：样品的提取次数、样品的提取时间、流动相组成、流动相pH值、流速、色谱柱柱温、色谱批号/品牌等。
气相色谱法的典型变化条件：色谱批号/品牌、固定相、不容类型单体、载气流速、柱温、进样口温度、检测器温度。
（六）专属性
专属性定义：其他成分（如杂质、降解物、辅料等）可能存在下，釆用的分析方法能够正确鉴定、检出被分析物质的特性。
专属性试验适用范围：
1. 鉴别反应、杂质检查、含量测定均应考察其专属性
2. 如一种方法不够专属，可由其它分析方法予以补充
数据要求：
1. 强制降解试验应报告杂质归属、物料守恒、峰纯度、降解率，必要时进行降解机理分析。
2. 物料守恒应在80%到120%之间。
3. 应提供专属性试验图谱。
4. 强制降解试验时，同步进行空白平行试验，排除空白干扰。
点击关注我 药研助力社 或扫码关注我，更多干货知识免费分享
