大家好，我是科研实验汪。前面出过一期关于“蛋白浓度计算”的视频，根据大家需求，今天再给大家整理一份文字版本的供大家参考学习。
蛋白浓度的计算是Western Blot实验中比较重要的一步，蛋白浓度计算的准确，确保了蛋白上样的准确性，进而保证最终实验结果的准确。
蛋白浓度怎么算呢？接下来手把手教你:
用BCA蛋白浓度测定法在酶标仪上获得吸光度数据后，在电脑上进行下列操作
首先打开电脑，建立一个“蛋白浓度计算”Excel表格。打开表格，先输入蛋白标准品浓度（ug/ul），分别是0,0.025,0.05,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5
然后将酶标仪获取的蛋白标准品吸光度值复制粘贴到表格中。接下来计算其平均值
鼠标右键设置单元格格式，保留两位小数
为了使标准曲线过原点，接下来需要减去背景值，即每一个平均值都需要减去蛋白标准品浓度为0ug/ul所对应的吸光度平均值
选中蛋白标准品浓度列和减去背景值列
插入散点图
编辑插入的散点图，鼠标右键选择添加趋势线、显示公式、添加R值
标准曲线制作好后，输入待测样本的吸光度值，并计算其平均值
保留两位小数
然后带入标曲的y=kx b函数关系式中，蛋白样本平均值即为y值，求x值，即为96孔板中蛋白浓度
图为96孔板蛋白稀释20倍
同样的方法保留两位小数
因为测蛋白浓度（96孔板中）时，蛋白稀释了20倍，所以真正的蛋白浓度需要再乘于20
保留两位小数后即可
接下来计算蛋白上样量，以80ug蛋白上样量为例
再计算上样缓冲液的量，以4x上样buffer为例
最后得出蛋白上样量后就可以煮蛋白，进行后续操作。
小伙伴们，你学废了吗？欢迎点赞转发评论呀！还有什么想了解的实验技术，可以评论私信哦。
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