近日，来自普林斯顿大学的学者在国际学术顶尖杂志《自然》子刊Nature Microbiology上发表了一篇最新的文献，文章的题目为“Core components of DNA lagging strand synthesis machinery are essential for hepatitis B virus cccDNA formation”，其中第一作者为我国学者魏磊！文章围绕着cccDNA展开，确定了HBV cccDNA形成的关键成分。这一发现对于完全治愈乙肝意义重大，下面让我们一起来看看相关的研究结果！
乙型肝炎病毒（HBV）困扰着全球20亿人，其中2.57亿慢性感染患者有着罹患肝细胞癌的风险。HBV具有3.2kb的部分双链DNA基因组，该基因组被分成五个部分重叠的开放阅读框。这些编码HBV表面蛋白（HBsAg），HBV E抗原（HBeAg），HBV核心蛋白（HBc），X蛋白和病毒聚合酶。病毒的进入取决于HBsAg大蛋白与肝细胞上表达的胆汁酸转运蛋白-牛磺胆酸钠共转运多肽（NTCP）的相互作用。
在病毒进入细胞后后，HBV病毒体将其3.2kb的松弛环状DNA（rcDNA）基因组传递到宿主细胞核中。要建立长期的慢性感染，必须在宿主因子的作用下通过复杂的程序修复不完全的rcDNA，以形成游离的共价闭合环状DNA（cccDNA），其作为HBV病毒的转录模板进行下一步的复制过程。
由于cccDNA难以清除的，目前的HBV药物治疗基本无法彻底治愈cccDNA。阻断cccDNA的形成和清除现有的cccDNA库被认为是治愈患者的关键。因此，阐明与cccDNA形成有关的因素和机制对确定新药靶点至关重要。
为了回答这个cccDNA究竟是如何形成的问题，Lei Wei博士等人在这项研究中采用了一种“非常规”的病毒研究方法，他们利用酵母来破译HBV的复制机制。rcDNA的修复是一个多步骤过程。尽管进行了数十年的努力，但HBV cccDNA的形成从未用纯化的人类蛋白质重建，而cccDNA形成所需的全套因子仍然未知。最近遗传学研究已经牵连TDP2，translesional DNA聚合酶（POL）κ，POLα，DNA连接酶1和3（LIG1和LIG3）和襟翼内切核酸酶1（FEN-1）参与的cccDNA形成。
但是，缺乏重组cccDNA形成的生化系统阻碍了这些蛋白质参与rcDNA修复的直接证据。研究人员建立了完全支持各种HBV rcDNA底物修复以形成cccDNA的生化系统。确定了DNA滞后链合成中涉及的五个核心因素，它们是酵母提取物中cccDNA形成所必需的。
然后，验证了可能会在人体提取物中耗尽的因素的影响。
最终，研究团队用五种纯化的人类蛋白质/复合物（增殖细胞核抗原（PCNA），复制因子C（RFC）复合物，POLδ，FEN-1和LIG1）重建了rcDNA修复，并将它们定义为对重组HBV cccDNA的形成所必须的关键因素！
小编看了这篇文章非常激动！希望后续的研究尽快开展，毕竟靶向cccDNA的治疗方案才是真正意义上的彻底治愈的方法！
参考：Wei, L., Ploss, A. Core components of DNA lagging strand synthesis machinery are essential for hepatitis B virus cccDNA formation. Nat Microbiol (2020). https://doi.org/10.1038/s41564-020-0678-0
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