《蒙娜丽莎》画像没有眉毛和睫毛，面庞看起来十分和谐。直视蒙娜丽莎的嘴巴，会觉得她没怎么笑；然而当看着她的眼睛，感觉到她脸颊的阴影时，又会觉得她在微笑。有研究人员利用微表情理论得出结论：蒙娜丽莎的微笑中，含有83%的高兴、9%的厌恶、6%的恐惧、2%的愤怒 。
神秘字符
资料来源于百度百科
意大利国家文化遗产理事会主席西尔瓦诺·温切蒂借助显微镜观察油画中蒙娜丽莎的眼睛，发现微小的字符。肉眼看不出来。她绿褐色的右眼球上画有黑色的LV字样，很明显这是列奥纳多·达芬奇的姓名首字母。
左眼球上的字符尚未辨明，但看起来是字母CE，也可能是B或者S。除眼睛外，画作其他位置也藏有字符，在背景中桥拱上可以看到数字72，也可能是字母L和数字2。
真伪之谜
某些收藏家声称他们藏有真正的《蒙娜丽莎》，数量达60幅之多。美国缅因州伯特兰美术馆在1984年收到一幅《不微笑的蒙娜丽莎》，经测定，此画确实是当年达·芬奇的手笔，画中的人物除了不微笑以外，其余都酷似蒙娜丽莎本人。
背景之谜
加利福尼亚大学教授卡罗·佩德雷蒂认为，蒙娜丽莎身后的背景是意大利中部阿雷佐市布里阿诺桥附近的景色。佩德雷蒂的证据是，达·芬奇出生在距阿雷佐约100公里的芬奇镇，并曾经在阿雷佐生活过，这一地区的原始景观与《蒙娜丽莎》的背景几乎完全一样。
英国《卫报》网站2011年1月9日报道：意大利艺术史学家卡拉·格洛里说，画中蒙娜丽莎肩上方的背景大桥和一条道路属于意大利北部小镇博比奥。
原型之谜
500多年来历史学家们一直为达·芬奇名画《蒙娜丽莎》的原型争论不休。意大利佛罗伦萨市教师吉乌塞普·帕兰蒂提出，蒙娜丽莎是一位有5个孩子的“家庭主妇”。
帕兰蒂对佛罗伦萨市档案进行了长达25年的研究，得出结论：《蒙娜丽莎》原型是达·芬奇父亲一位朋友的妻子丽莎·格拉迪尼，她是一名有5个子女的家庭主妇。
达芬奇
据帕兰蒂考证，丽莎在1495年16岁时嫁给佛罗伦萨丝绸商人弗兰西斯科·吉奥康杜，而吉奥康杜则是达·芬奇父亲皮耶罗的好友兼邻居。丽莎是吉奥康杜的第二任妻子。这对夫妻的感情很好，育有5个子女。
吉奥康杜在自己的遗嘱中称，丽莎是他“心爱的”和“忠实的”的妻子。帕兰蒂认为，《蒙娜丽莎》的画像完成于丽莎24岁那年。达·芬奇的父亲安排了一切，自己花钱让儿子为朋友的妻子画了这幅画。
《蒙娜丽莎》美国巡展
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