音频部分为大程讲解

rna提取电泳图详细分析(如何提取RNA-大程给你讲分子克隆)(1)

提取RNA的实验中各个试剂的作用是什么?

用Trizol进行抽提,基本就是酸性酚抽提法。

RNA提取主要是内源和外源RNase

trizol中有酚和异硫氰酸胍,和B-巯基乙醇

trizol中有酚和异硫氰酸胍,和B-巯基乙醇

酚能使核蛋白质与核酸解聚(氯仿也可以),酚虽可有效的变性蛋白质,但是它不能完全抑制RNA酶活性,可以加入0.1%的8-羟基喹啉,与氯仿联合使用可增强对RNase的抑制。

异硫氰酸胍属于解偶剂,是一类强力的蛋白质变性剂,可溶解蛋白质,并使蛋白质二级结构消失,细胞结构降解,核蛋白迅速与核酸分离。

B-巯基乙醇主要破坏RNase蛋白质中的二硫键。

加入氯仿,虽然有变性蛋白质的作用,但是其主要用处是用来分相,实际上是加速有机相和水相的分层。一般的trizol试剂在4度下是油状悬浮液,提高温度,放置一段时间,自然也会分相。

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