高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用【1】。
HPLC工作原理：
混合物各组分别通过与固定相、流动相之间的相互作用，在色谱柱中进行分离纯化，固定相是存在于色谱柱中一种非常小的多孔颗粒材料，流动相是在高压迫使下通过色谱柱的一种溶剂或混合溶剂。用注射器注入样品，通过一个连接样品回路的阀门，使样品与流动相混合，随后样品中各组分以不同的速率通过色谱柱，由于各组分与固定相之间的吸附能力不同，各组分依次流出色谱柱，通过合适的检测器将组分浓度转换成电信号传递到计算机的HPLC软件上。运行结束后，在HPLC软件中就可以得到色谱图
HPLC工作原理图及仪器组成【2】：
HPLC技术优势：
具有高压、高效、高速、高灵敏度、高选择性等特点。
HPLC实验用水建议：
高效液相色谱HPLC流动相的水应该是电导率为18.2 M/cm（25℃）的超纯水，并通过0.22um终端过滤器，除去颗粒物、有机物、无机离子及 CO2等气体的超纯水
液相色谱实验建议用低TOC含量的一级水
因为水中的杂质可能：
1、在梯度运行中污染物会产生峰，这将加剧峰的鉴定和量化的困难程度；
2、标准液用含有杂质的超纯水配置时，样品的鉴定和量化时就不会太精确；
3、可能会损坏高效液相色谱HPLC的柱子
液相色谱实验用超纯水机推荐：
Smart Mini超纯水机采用全塑模具生产，外观漂亮，体积小，不占实验室空间，为减少产生TOC的来源可能，整机采用简洁化设计，减少主机内纯水管路，采用内置6.5L Mini纯水水箱尽量减少微生物滋生可能性，配备降解TOC含量的UV紫外灯，做到自来水进出纯水和超纯水的一机两用，性价比较高。
HPLC日常操作注意事项【3】【4】
选择流动相时应注意的几个问题：
1、使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。
2、避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。
3、试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。
4、流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有较强的紫外吸收，一般检测波长应大于流动相的截止波长。
泵的维护保养：
1、防止任何固体微粒进入泵体，否则会磨损柱塞、密封环缸体和单向阀，因此应预先对流动相进行过滤，可采用Millipore滤膜(0．22μm或 0．45μm )等过滤。泵的入口都应该连接砂滤棒(或片)， 输液泵的滤器应经常更换。
2、流动相不应含有任何腐蚀性物质， 含有缓冲液的流动相不应保留在泵内， 尤其是停泵过夜或更长时间。分析工作结束后必须用纯水充分清洗后，再换成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂(对于反相键合固定相，可以是甲醇或甲醇和水)
3、泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、密封环或缸体，最终产生漏液。
4、输液泵的工作压力不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。
紫外检测器维护保养：
1、流通池进入气泡会干扰基线，并极难排出，应使用充分脱气的流动相，以减少气泡的产生。
2、应定期冲洗系统，避免流通池干涸。
3、检测器中氘灯( 光源) 随着使用时间的增加，氘灯强度降低，噪音会不断增大，故分析前柱平衡得差不多时，再打开检测器，分析工作结束及时关闭检测器（频繁开关检测器也会缩短检测器寿命，一般开启间隔少于4小时，不建议关闭检测器）。
4、尘埃在静电的作用下容易覆盖在光学元件上， 使光传播效率降低，增加了光散射， 影响分析效果， 因此检测器周围的环境应保持清洁。
内容引用：
【1】高效液相色谱在中草药质量控制中的应用?．中国知网
【2】图片来源：迪信泰检测平台
【3】赵贝贝，张艳，唐涛，等．高效液相色谱的使用与维护．实验室科学，Jun. 2011，Vol. 14 No. 3
【4】王淑静，毕建杰，柳洪洁，郝建民，等．高校液相色谱使用中常见问题及对策．实验室研究与探索， 11. 2010 ，Vol. 29 No. 11
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